عنوان: کلونینگ توالی کامل ژنوم ویروس موزائیک توتون 189 صفحه

خرید این محصول

» :: عنوان: کلونینگ توالی کامل ژنوم ویروس موزائیک توتون 189 صفحه

عنوان:

کلونینگ توالی کامل ژنوم ویروس موزائیک توتون

چکیده فارسی

ویروس موزائیک توتون (TMV) ، یکی از مهمترین عوامل بیماریزا در سراسر آفاق است که بیش از 200 گونه گیاهی را آلوده باده نماید. هر یک از اجزای جوراجور ژنوم دارای نقش مهمی باب ساختار ژنوم ویروس می باشد، از تمام پروتئین حرکتی که در تحرک سلول به سلول در TMV موثراست و پروتئین پوششی که نقش مهمی باب پایداری و انتقال ویروس ایفا میکند. درایران در خصوص بازشناخت توالی تام ژنوم ویروس موزائیک توتون تا کنون اقدامی صورت نگرفته است. لذا تعیین توالی ویروس و خواندن اختلاف های جدایه های موجود در کشور با اطلاعات حاضر باب منابع از جمله اقدامات اولیه و ضروری جهت انجام مطالعات مولکولی روی این ویروس است، بنابراین با آماج بررسی توالی ژن کدکننده پروتئین حرکتی و پروتئین پوششی در جدایه گزارش شده از ایران و مقایسه توالی تعیین ترادف شده با جدایه های مختلف در بانک ژن NCBI مطالعه اسم انجام شد. توالی ژن کدکننده این پروتئین ها در جدایه های مناطق مختلف دنیا گزارش شده است. استخراج RNA ژنومی ویروس از برگ گیاهان توتون آلوده بدست آمد و با استعمال از پرایمر PSh60-R1 مرحله ساخت cDNA انجام شد. با استفاده از آغازگرهای اختصاصی PSh63-F و PSh60-R1 بخش کدکننده پروتئین حرکتی و پروتئین پوششی تکثیر و بصورت دو جهته توالی یابی شد. همردیفی توالی بدست آمده با توالی مشابه از نژادهای جوراجور انجام شد و درخت خویشاوندی رسم گردید. نتایج نشان انصاف جدایه اعلام شده از ایران با نژاد TMV-U1 قرابت بالائی دارد. از بین 799 جایگاه در سطح نوکلئوتید برای پروتئین حرکتی 6 جهش در مقایسه با نژاد TMV-U1 مشاهده و در مجموع 266 اسید آمینه 2 جهش دیده شد. آنالیزهای انجام شده براساس توالی نوکلئوتیدی کد کننده ناحیه پروتئین پوششی ویروس باب تشبیه با اصل TMV-U1 2 جهش در روی نوکلئوتید را آرم داد. در توالی های بالادست و بینابین دو ژن کدکننده پروتئین پوششی و حرکتی نیز پرش هایی دید شد. پرش در این مناطق به دلیل نقش تنظیمی باب بیان ژن حائز اهمیت است.

سیاهه مطالب

آغاز                                                                                                                      صفحه

فصل اول:کلیات تحقیق........................................................................................................1

1-1- ویروس موزائیک توتون...............................................................................................1

1-2- خصوصیات فیزیکی ویروس........................................................................................2

1-3- اهمیت ویروس موزائیک توتون....................................................................................2

1-4- اهداف مطالعه...................................................................................................... .......4

فصل دوم: مبانی نظری و پیشینه تحقیق.................................................................................7

2-1-تاریخچه بیماری در جهان.............................................................................................8

2-2-جزئیات ویروس (خصوصیات فیزیکی)........................................................................9

2-3-نژادهای ویروس.........................................................................................................11

2-4-انتقال و انتشار ویروس................................................................................................15

2-5-علائم بیماری..............................................................................................................16

2-6-همانندسازی (رونوشت ویروس در یاخته میزبان) .......................................................17

2-6-1- مکان همانندسازی.................................................................................................18

2-7-ساختار ژنوم و ORF ها و نواحی غیر کد شونده........................................................18

2-7-1- عملکرد پروتئینهای ویروس...................................................................................20

2-7-1-1- پروتئین پوششی............................................................................................................................20

2-7-1-2- پروتئین 126 و 183 کیلو دالتون........................................................................20

2-7-1-3- پروتئین حرکتی.................................................................................................21

2-8-کنترل بیماری و مقاومت.............................................................................................21

2-9- کارهای انجام شده در خصوص ویروس موزائیک توتون...........................................23

فصل سوم: روش تحقیق............................................................................................................25

3-1- الگو برداری ......................................................................................................................27

3-2- استخراج RNA..................................................................................................................25

3-2-1- آیین‌نامه 1: مراحل استحصال RNA از بافت گیاه حرف استفاده از کیت .................25

3-3- ساخت cDNA..................................................................................................................26

3-4- آنالیز بیوانفورماتیک و طراحی آغازگرها.........................................................................27

3-4-1- بازیابی توالی ژنوم ویروس موزائیک توتون..........................................................27

3-4-2- همردیفی جدایه های مختلف ویروس به سمت غرض طراحی آغازگرها .........................27

3-4-3- طراحی آغازگرها............................................................................................................................28

3-5- بهینه سازی تکثیر قطعه کامل ژنوم ویروس موزائیک توتون حرف استفاده از آغازگرهای اختصاصی مختلف.....................................................................................................   .......30

3-5-1- واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) حرف استفاده از cDNA اسم شده و آغازگرهای PSh60 F/R..........................................................................................................................................................30

3-5-2- واکنشNested PCR  حرف آغازگرهای (PSh60F/PSh60R2) با استفاده از DNA تکثیر شده باکیتLong................................................................................................................33

3-5-3- واکنش Long PCR با آغازگرهای (PSh60F/PSh60R عنوان کلونینگ توالی کامل ژنوم ویروس موزائیک توتون 189خرید عنوان دانلود عنوان

amir سه‌شنبه 13 تیر 1396 ساعت 10:03

0 لایک

نظرات 0 + ارسال نظر

امکان ثبت نظر جدید برای این مطلب وجود ندارد.